Plásmido Doble Nickase (h) CYP24: sc-401233-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CYP24 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CYP24 (h) y el plásmido de doble nickasa CYP24 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CYP24A1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CYP24 Anticuerpo (E-7): sc-365700
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CYP24 | sc-401233-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CYP24 | sc-401233-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP24A1 codifica la enzima mitocondrial del citocromo P450 CYP24A1 (CYP24), un regulador clave del metabolismo de la vitamina D que cataliza la 24-hidroxilación y la posterior inactivación de la 1,25-dihidroxivitamina D3 y la 25-hidroxivitamina D3. Al controlar el recambio del calcitriol, CYP24A1 modula programas transcripcionales dependientes del VDR que influyen en la homeostasis del calcio y el fosfato, la diferenciación epitelial y la señalización inmunitaria. La actividad alterada de CYP24A1 se ha vinculado con una señalización de la vitamina D desregulada y con trastornos del metabolismo mineral, y su expresión se evalúa con frecuencia en contextos en los que se perturba el equilibrio de la vía del VDR, como en la biología del cáncer y en estados inflamatorios. Como P450 mitocondrial, CYP24A1 también se entrecruza con procesos redox celulares y la adaptación metabólica debido a su dependencia de socios de transferencia de electrones.
CYP24 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYP24A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYP24A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYP24A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYP24A1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.