CYP1B1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-419899-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CYP1B1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CYP1B1ダブルニカースプラスミド（m）およびCYP1B1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Cyp1b1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CYP1B1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-419899-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP1B1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-419899-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのCyp1b1は、シトクロムP450酵素であるCYP1B1をコードしている。CYP1B1はヘム-チオラート型モノオキシゲナーゼであり、内因性基質および外来性化合物（ゼノバイオティクス）の酸化的代謝を触媒する。これには、ステロイドおよびレチノイドの恒常性に関与する水酸化反応も含まれる。CYP1B1の活性は、AHR（芳香族炭化水素受容体）によって駆動される転写プログラムや、第I相代謝経路と関連しており、環境リガンドや酸化ストレスに対する細胞応答を形成する。レドックスバランスや生理活性代謝物の産生に影響を及ぼすことから、Cyp1b1は血管生物学、眼の発生、ならびに毒性物質による障害に対する組織特異的な感受性といった文脈で研究されてきた。マウスモデルでは、Cyp1b1機能の変化が代謝中間体の下流にあるシグナル伝達ネットワークに影響し得るため、代謝―炎症の機構研究や、発生に関連する表現型の解析を支える。
CYP1B1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Cyp1b1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Cyp1b1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Cyp1b1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Cyp1b1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。