Plásmido CRISPR de Activación (h) CYP1B1: sc-400907-ACT

CYP1B1 codifica una monooxigenasa del citocromo P450 que cataliza el metabolismo oxidativo de sustratos endógenos, incluidos los estrógenos, los retinoides y derivados del ácido araquidónico, así como numerosos xenobióticos. Como parte del metabolismo de fase I, la actividad de CYP1B1 se cruza con programas de desintoxicación regulados por AHR e influye en el equilibrio redox celular mediante la generación de intermediarios reactivos. La expresión o la función alteradas de CYP1B1 se han asociado con una desregulación de la señalización de esteroides, de las respuestas al estrés oxidativo y con una susceptibilidad específica de tejido a la exposición a tóxicos. El CYP1B1 humano se estudia con frecuencia en el contexto de la bioactivación de carcinógenos, la biología dependiente de hormonas y trastornos del desarrollo ocular vinculados a variantes hereditarias.

CYP1B1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYP1B1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP1B1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYP1B1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYP1B1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP1B1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYP1B1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP1B1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP1B1 en células tumorales con expresión de CYP1B1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.