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CYP1B1CRISPR激活质粒(h) | sc-400907-ACT | 20 µg | $397.00 |
CYP1B1 编码一种细胞色素 P450 单加氧酶,可催化多种内源性底物的氧化代谢,包括雌激素、维甲类化合物以及花生四烯酸衍生物,同时也能代谢众多外源性化合物。作为 I 相代谢的一部分,CYP1B1 的活性与 AHR 调控的解毒程序相互交叉,并通过生成反应性中间体影响细胞的氧化还原平衡。CYP1B1 的表达或功能发生改变与类固醇信号失衡、氧化应激反应异常以及组织对毒物暴露的易感性差异有关。人类 CYP1B1 常在致癌物生物活化、激素依赖性生物学过程以及与遗传变异相关的眼部发育障碍等研究背景下被重点关注。
CYP1B1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CYP1B1的表达。
CYP1B1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CYP1B1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CYP1B1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CYP1B1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CYP1B1位点,并能够研究内源性位点上依赖于CYP1B1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CYP1B1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CYP1B1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。