Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CYP11B1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403040-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP11B1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP11B1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP11B1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP11B1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CYP11B1: sc-374096
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP11B1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP11B1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP11B1 kodiert ein mitochondriales Cytochrom‑P450‑Enzym, das 11β‑Hydroxylierungsschritte katalysiert, die für die Biosynthese von Cortisol und Corticosteron in der Nebennierenrinde essenziell sind. Als Bestandteil des Steroidogenesewegs wirkt CYP11B1 nachgeschaltet von der Cholesterinmobilisierung und den mitochondrialen Elektronentransfersystemen und integriert die durch ACTH regulierte Steuerung der Glukokortikoidproduktion. Eine veränderte CYP11B1‑Aktivität stört die Glukokortikoidhomöostase und den Steroidfluss in der Nebenniere, was für Erkrankungen relevant ist, die durch eine abnorme Cortisolproduktion und kompensatorische Veränderungen in Mineralokortikoid‑ und Androgenwegen gekennzeichnet sind. CYP11B1 wird daher häufig in Nebennierenzellmodellen untersucht, um Steroidogenese, mitochondriale P450‑Katalyse und die endokrine Stressantwort‑Signalgebung zu erforschen.
CYP11B1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP11B1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP11B1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP11B1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP11B1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.