CYP11B1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403040-ACT

CYP11B1は、ミトコンドリア局在のモノオキシゲナーゼであるシトクロムP450 11β-ヒドロキシラーゼをコードしており、副腎ステロイド生合成の後期段階を触媒します。具体的には、11-デオキシコルチゾールからコルチゾールへの変換、および11-デオキシコルチコステロンからコルチコステロンへの変換などに関与します。この酵素は、アドレノドキシン／アドレノドキシン還元酵素からの電子移動を必要とするヘム依存性の酸化還元反応の中で機能し、ミトコンドリア代謝とホルモン産生を結び付けています。CYP11B1活性は、視床下部―下垂体―副腎（HPA）軸の制御や、糖質コルチコイドおよび鉱質コルチコイドに応答する下流の転写プログラムに影響します。CYP11B1の発現や機能の変化は先天性副腎過形成の表現型と関連し、副腎疾患やステロイド駆動性の病態のモデル化に重要な内分泌調節異常の一因となります。

CYP11B1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP11B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP11B1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP11B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP11B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP11B1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP11B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP11B1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP11B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP11B1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。