cyclin T1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400623

概要

CCNT1は、P-TEFb複合体の制御サブユニットであるサイクリンT1をコードしており、CDK9と協働してRNAポリメラーゼIIをリン酸化し、転写伸長を促進します。プロモーター近傍でのポーズ（promoter-proximal pausing）を制御することで、サイクリンT1は細胞周期進行、ストレス応答、分化に関連する発現プログラムに影響を与えます。CCNT1の機能は、転写と連動したRNAプロセシングやクロマチンに関連した制御とも交差し、全体的な遺伝子発現ダイナミクスを形作ります。P-TEFbシグナル伝達およびサイクリンT1依存的な転写制御の破綻は、がん遺伝子性の転写プログラムや、ウイルス転写に関わる宿主—病原体相互作用など、さまざまな文脈で関与が示唆されています。

cyclin T1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCCNT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CCNT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CCNT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cyclin T1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cyclin T1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CCNT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cyclin T1の機能に不可欠なCCNT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CCNT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cyclin T1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcyclin T1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CCNT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cyclin T1 HDRプラスミド（h）および cyclin T1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCCNT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCCNT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。