CXCR-4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400254-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CXCR-4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CXCR-4 Double-Nickase-Plasmid (h) und CXCR-4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CXCR4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CXCR-4: sc-53534
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CXCR-4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400254-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CXCR-4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400254-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CXCR4 kodiert den Chemokinrezeptor CXCR-4, einen siebenfach transmembranären GPCR, der CXCL12/SDF-1 bindet und dadurch Chemotaxis, Zelladhäsion und Überlebenssignale reguliert. Die CXCR-4-Aktivität koppelt an G-Protein- und β-Arrestin-Signalwege und aktiviert nachgeschaltete Kaskaden wie PI3K/AKT, MAPK/ERK sowie PLC-vermittelte Calciumflüsse, um Zytoskelett-Remodelling und gerichtete Migration zu koordinieren. Diese Achse ist zentral für den Leukozytentransport und die Retention hämatopoetischer Zellen in Knochenmarknischen und wird häufig in Studien zur Dynamik von Immunzellen und zur Dissemination von Tumorzellen untersucht. Eine Fehlregulation von CXCR4-Signalisierung und -Expression ist mit veränderten Entzündungsreaktionen sowie krebsassoziierten Invasions- und Metastasierungsphänotypen verbunden, was CXCR4 zu einem häufigen Ziel mechanistischer Signalanalysen macht.
CXCR-4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CXCR4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CXCR4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CXCR4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CXCR4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.