CXCR-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400254-ACT

CXCR4 codifica o recetor de quimiocinas CXCR-4, um GPCR de sete domínios transmembrana que se liga a CXCL12/SDF-1 para regular a quimiotaxia, o posicionamento celular e o homing tecidular nos compartimentos hematopoiético, imunitário e estromal. A sinalização de CXCR-4 ativa vias a jusante que incluem a inibição de AMPc mediada por Gαi, PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLC–PKC e fluxos de cálcio, integrando sinais que influenciam a migração, a sobrevivência e a adesão. A atividade desregulada de CXCR4 tem sido implicada em alterações no tráfego de leucócitos, em microambientes inflamatórios e em programas aberrantes de motilidade celular. Estas funções fazem de CXCR4 um alvo amplamente utilizado para estudar a migração guiada por recetores, as interações com nichos e fenótipos induzidos pelo microambiente em modelos celulares humanos.

CXCR-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CXCR4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CXCR-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CXCR4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CXCR4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CXCR-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CXCR4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CXCR-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CXCR-4 em células tumorais com expressão de CXCR4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.