Plasmide CRISPR/Cas9 KO CXCL16 (m): sc-425819

Présentation

Cxcl16 code pour CXCL16, une chimiokine transmembranaire pouvant être clivée par protéolyse afin de générer un ligand soluble de CXCR6, coordonnant le recrutement chimiotactique et la rétention des lymphocytes T activés, des cellules NKT et d’autres sous-populations de leucocytes. CXCL16 participe à des réseaux de signalisation inflammatoire qui façonnent la surveillance immunitaire tissulaire, l’adhésion leucocytaire et le dialogue intercellulaire médié par les cytokines au sein des microenvironnements vasculaires et parenchymateux. Dans des modèles murins, la signalisation CXCL16/CXCR6 a été associée à des processus tels que l’inflammation athéroscléreuse, le trafic des cellules immunitaires dans le foie et le poumon, ainsi que les interactions tumeur–système immunitaire, ce qui la rend pertinente pour l’étude de l’inflammation chronique et des pathologies à médiation immunitaire. Sa régulation recoupe des programmes inflammatoires associés à NF-κB et des voies de clivage de l’ectodomaine qui contrôlent l’équilibre entre l’activité de la chimiokine sous forme membranaire et sous forme soluble.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CXCL16 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cxcl16 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cxcl16, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cxcl16 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CXCL16.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cxcl16 pour l'étude de la signalisation de CXCL16, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cxcl16 essentiels à la fonction de CXCL16
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cxcl16 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CXCL16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CXCL16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cxcl16. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CXCL16 plasmide HDR (m) et le CXCL16 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cxcl16 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cxcl16 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.