CUL-4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401967

概要

CUL4Aは、CRL4 E3ユビキチンリガーゼ複合体の中核となる足場タンパク質であるカリュリン4Aをコードしており、DNA複製、クロマチン動態、細胞周期進行を制御するタンパク質のユビキチン化とプロテアソーム分解によるターンオーバーを統括します。DDB1などのアダプタータンパク質や、複数のDCAF基質受容体と協調することで、CUL-4Aはヌクレオチド除去修復、複製ライセンシング、UV誘発性DNA損傷への応答といった過程を調節します。CUL4A依存的なプロテオスタシスが破綻すると、ゲノム安定性やチェックポイント制御が乱れ、CRL4活性の変化ががん関連表現型や、DNA修復不全を伴うその他の疾患と結び付く可能性があります。ユビキチン介在シグナル伝達の中心的結節点として、CUL-4Aはクロマチン制御を複製ストレスや転写制御に連結する経路で頻繁に研究されています。

CUL-4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCUL4A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CUL4A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CUL4Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CUL-4Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CUL-4Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CUL4A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CUL-4Aの機能に不可欠なCUL4Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CUL4Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CUL-4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCUL-4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CUL4A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CUL-4A HDRプラスミド（h）および CUL-4A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCUL4Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCUL4A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。