CTLA-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400948-ACT

O gene humano **CTLA4** codifica o **CTLA-4 (CD152)**, um receptor inibitório de checkpoint imunológico expresso predominantemente em células T ativadas e em células T reguladoras, que restringe a ativação das células T ao competir com o CD28 pela ligação a CD80/CD86 em células apresentadoras de antígeno. Ao atenuar a sinalização coestimuladora, o CTLA-4 modula vias a jusante, incluindo PI3K–AKT, NF-κB e MAPK, ajudando a manter a tolerância periférica e a limitar a produção excessiva de citocinas. A expressão ou sinalização desregulada de CTLA-4 está associada à ruptura da homeostase imunológica e a respostas linfocitárias alteradas, implicadas em fenótipos autoimunes e inflamatórios. Como um nó-chave em circuitos imunorregulatórios, o CTLA4 é amplamente estudado em estados funcionais de células T, na dinâmica de ativação induzida por antígenos e em mecanismos de supressão imune.

CTLA-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTLA4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CTLA-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTLA4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTLA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CTLA-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTLA4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CTLA-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CTLA-4 em células tumorais com expressão de CTLA4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.