CTHRC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418193-ACT

O CTHRC1 humano (collagen triple helix repeat containing 1) codifica uma proteína secretada associada à matriz extracelular, que modula o remodelamento tecidual, a migração celular e a dinâmica de adesão. O CTHRC1 tem sido associado à regulação da sinalização de TGF-β e das vias não canônicas de Wnt/polaridade celular planar, influenciando a organização do citoesqueleto e a motilidade direcional. Alterações na expressão de CTHRC1 são frequentemente estudadas no remodelamento fibrótico, no reparo de feridas e em programas estromais associados a tumores, nos quais a renovação da matriz extracelular e o comportamento invasivo estão desregulados. Como fator do microambiente, o CTHRC1 é usado como marcador e como nó mecanístico para investigar a sinalização dirigida pela matriz, processos semelhantes à transição epitélio-mesênquima e a formação de nichos metastáticos.

CTHRC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTHRC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CTHRC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTHRC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTHRC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CTHRC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTHRC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CTHRC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CTHRC1 em células tumorais com expressão de CTHRC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.