CTDSPL2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-435953-LAC-2

O gene murino Ctdspl2 codifica a CTDSPL2, uma fosfatase nuclear da família haloacid dehalogenase (HAD) implicada na regulação da transcrição por meio da desfosforilação de resíduos de serina no domínio C-terminal da RNA polimerase II, influenciando assim programas de expressão gênica ligados ao controle do ciclo celular e à diferenciação. A CTDSPL2 se insere em redes de sinalização mediadas por fosfatases que coordenam processos associados à cromatina, o processamento de RNA e as saídas de vias de desenvolvimento em células de mamíferos. A desregulação da atividade de fosfatases direcionadas ao CTD é amplamente relevante em modelos de estresse proliferativo e de comprometimento de linhagem alterado, tornando o Ctdspl2 um alvo útil para estudar mecanismos de controle transcricional dependentes de fosforilação. A edição gênica de Ctdspl2 em sistemas murinos possibilita a investigação funcional da atividade de fosfatases nucleares, o mapeamento de consequências transcricionais a jusante por ensaios baseados em RNA-seq/ChIP e a dissecação de interações entre vias em linhagens celulares engenheiradas ou em modelos genéticos in vivo.

As Partículas de Ativação Lentivirais CTDSPL2 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Ctdspl2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CTDSPL2 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Ctdspl2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CTDSPL2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Ctdspl2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.