CTAGE5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406164

概要

CTAGE5（MIA2としても知られる）は、COPII依存的な輸送およびER出口部位（ER exit sites）の形成・維持を支える、ER輸送機構の膜結合性コンポーネントをコードしています。カーゴの積み込みと小胞形成を協調的に制御することで、CTAGE5は効率的な分泌とERプロテオスタシスの維持に寄与しており、これらの過程は小胞体アンフォールドタンパク質応答（UPR）やERストレスシグナルと密接に関連しています。CTAGE5機能が損なわれると、分泌経路のフラックスが変化し、細胞内でのタンパク質取り扱いに影響を及ぼし、代謝性または炎症性ストレスに対する細胞応答を組み替える可能性があります。ヒトの生物学では、分泌能とER恒常性が疾患関連表現型に影響する状況（腫瘍細胞の適応や免疫関連シグナルなど）で、これらの経路がしばしば研究されています。

CTAGE5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMIA2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MIA2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MIA2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CTAGE5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CTAGE5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MIA2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CTAGE5の機能に不可欠なMIA2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MIA2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CTAGE5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCTAGE5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MIA2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CTAGE5 HDRプラスミド（h）および CTAGE5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMIA2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMIA2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。