Plasmide CRISPR d'Activation (h) CSN8: sc-409800-ACT

COPS8 code pour CSN8, une sous-unité centrale du signalosome COP9 qui régule l’activité des ligases ubiquitine culline-RING via la déneddylation, modulant ainsi le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. En contrôlant la stabilité de régulateurs clés du cycle cellulaire, de facteurs de la réponse aux dommages de l’ADN et d’intermédiaires de la signalisation du stress, CSN8 contribue à coordonner la protéostasie, la prolifération et l’adaptation aux signaux environnementaux. La fonction de CSN8 recoupe des voies liées à l’apoptose, à l’autophagie et à la signalisation inflammatoire, ce qui reflète le rôle central de l’activité du signalosome COP9 dans l’homéostasie cellulaire. Une dérégulation de la signalisation ubiquitine associée à CSN8 a été impliquée dans des mécanismes pertinents pour diverses maladies, tels qu’une progression anormale du cycle cellulaire, une altération de la fonction du protéasome et un déséquilibre des voies de stress dans de multiples contextes tissulaires.

CSN8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COPS8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CSN8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COPS8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COPS8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CSN8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COPS8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CSN8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CSN8 dans les cellules tumorales présentant une expression de COPS8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.