Csk Double Nickaseプラスミド (h): sc-400992-NIC

CSKはCskをコードしており、Cskは細胞質性チロシンキナーゼで、SrcファミリーキナーゼのC末端にある阻害性チロシンをリン酸化することでそれらを負に制御し、免疫受容体、インテグリン、増殖因子受容体の下流におけるシグナル強度（振幅）を制限します。このゲートキーパーとしての機能を通じて、Cskは細胞接着と遊走、細胞骨格の再構築、ならびにT細胞受容体（TCR）シグナル伝達やフォーカルアドヒージョン（接着斑）シグナル伝達などの経路における受容体近傍のシグナル伝達に影響を及ぼします。CSKの活性や制御の変化は、免疫細胞の活性化閾値や増殖性シグナルプログラムを形作るリン酸化ネットワークを乱す可能性があります。CSKに関連したSrcファミリーキナーゼ制御の破綻は、免疫介在性および腫瘍性のシグナル伝達の文脈と関連づけられており、シグナル恒常性の機構モデルにおける研究対象としての重要性を示しています。

Csk ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CSK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CSK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CSKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CSKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。