CRISPR 데이터가 아님: 이 이미지는 CRISPR 실험 결과를 시각화하기 위한 항체 품질을 보여줍니다.
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CSA 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-403428-NIC
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- CSA Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- CSA 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 CSA 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 ERCC8을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 CSA Antibody (D-2): sc-376981
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
CSA 더블 틈내기효소 플라스미드 (h) | sc-403428-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CSA 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2) | sc-403428-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC8는 인간 CSA 단백질을 암호화하며, CSA는 WD40 반복 서열을 가진 인자로서 DDB1, CUL4A, RBX1과 함께 CRL4^CSA E3 유비퀴틴 리가아제 복합체를 형성해 전사-연계 뉴클레오타이드 절제 수선(TC-NER)을 조율합니다. CSA는 손상 부위에서 RNA 중합효소 II의 정지를 유발하는 병변을 해결하기 위해 수선 및 염색질 리모델링 활성을 모집하고, 유비퀴틴 의존적 방식으로 손상 반응 구성요소의 턴오버를 촉진합니다. 이러한 기능을 통해 CSA는 유전체 안정성, 자외선(UV) 유발 손상 이후 전사의 회복, 그리고 유전독성 스트레스 하에서의 세포 항상성 유지를 뒷받침합니다. ERCC8의 병적 기능 장애는 DNA 수선 질환인 코케인 증후군 A형(Cockayne syndrome group A)과 연관되어 있으며, 이는 TC-NER 결함, 전사 스트레스, 신경발달 취약성을 연구하기 위한 모델로 활용됩니다.
CSA 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 ERCC8 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 ERCC8 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 ERCC8의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, ERCC8 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.