Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400270-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Cryopyrin/NALP3/NLRP3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Cryopyrin/NALP3/NLRP3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Cryopyrin/NALP3/NLRP3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para NLRP3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Anticorpo (6F12): sc-134306
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400270-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400270-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O NLRP3 humano (criopirina/NALP3) é um recetor citosólico de reconhecimento de padrões que nucleia o inflamassoma NLRP3 em resposta a diversos sinais associados a patógenos e a dano, incluindo fluxo iónico, stress mitocondrial e dano lisossomal. Após a ativação, o NLRP3 monta-se com a ASC e a pró-caspase-1 para promover a ativação da caspase-1, favorecendo a maturação de IL-1β e IL-18 e desencadeando piroptose dependente da gasdermina D. Este eixo de sinalização é central para a regulação da imunidade inata e liga o stress metabólico e inflamatório a programas de citocinas a jusante. A atividade desregulada do NLRP3 e as suas variantes estão associadas a síndromes autoinflamatórias e contribuem para mecanismos inflamatórios estudados na gota, aterosclerose, neuroinflamação e modelos de doença metabólica.
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NLRP3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NLRP3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NLRP3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NLRP3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.