CRTAC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404534-ACT

CRTAC1 (proteína ácida da cartilagem 1) codifica uma proteína secretada associada à matriz extracelular, enriquecida na cartilagem e em outros tecidos conjuntivos, onde contribui para as interações célula–matriz e para a organização estrutural dos tecidos. O CRTAC1 tem sido associado à diferenciação de condrócitos e a processos de homeostase da matriz que se cruzam com vias de adesão e de remodelação da matriz extracelular. Foram relatadas alterações na expressão de CRTAC1 em condições musculoesqueléticas e em doenças degenerativas das articulações, o que o torna um marcador útil para estudar a biologia da cartilagem e a remodelação do tecido conjuntivo. In vitro, a modulação de CRTAC1 pode apoiar estudos mecanísticos sobre a composição da matriz, fenótipos de adesão celular e programas transcricionais relevantes para a integridade da cartilagem.

CRTAC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CRTAC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRTAC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CRTAC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CRTAC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRTAC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CRTAC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRTAC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRTAC1 em células tumorais com expressão de CRTAC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.