CRP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409601-ACT

CSRP2 codifica a proteína 2 rica em cisteína e glicina (CRP2), um adaptador que contém domínio LIM e coordena a organização do citoesqueleto de actina e programas de transcrição associados à forma celular, motilidade e diferenciação. A CRP2 é enriquecida em contextos relacionados a músculo liso e participa da mecanotransdução ao acoplar a dinâmica do citoesqueleto à regulação gênica no núcleo, incluindo vias envolvendo SRF/MRTF e outros co-reguladores transcricionais. Por meio dessas funções, o CSRP2 influencia o remodelamento vascular e fenótipos de migração celular relevantes para fibrose, biologia cardiovascular e processos estromais associados ao câncer e à metástase. Alterações na expressão de CSRP2 foram relatadas em diversos conjuntos de dados de doenças, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudar a sinalização do citoesqueleto e os circuitos de regulação gênica.

CRP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSRP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSRP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSRP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSRP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRP2 em células tumorais com expressão de CSRP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.