CRMP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404504

概要

DPYSL4は、コラプシン応答メディエータータンパク質3（CRMP-3）をコードしており、CRMPファミリーに属する細胞質のリン酸化タンパク質です。CRMP-3は、細胞外の誘導シグナルを微小管ダイナミクスや細胞骨格の再編成へと結び付けます。また、セマフォリンや、CRMPのリン酸化状態を調節する関連キナーゼの下流シグナル伝達経路を介して、神経突起の伸長、軸索ガイダンス、細胞形態の制御に関与するとされています。神経系以外の文脈でも、DPYSL4の発現はストレス適応プログラムや代謝リプログラミングと関連付けられており、ミトコンドリア機能、細胞運動、細胞生存といったプロセスとのつながりが示唆されています。DPYSL4/CRMP-3シグナルの異常は、神経疾患やがん関連表現型に関する研究で報告されており、経路解析のための機構的ターゲットとして有用であることが支持されています。

CRMP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDPYSL4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DPYSL4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DPYSL4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CRMP-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CRMP-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DPYSL4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CRMP-3の機能に不可欠なDPYSL4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DPYSL4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CRMP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCRMP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DPYSL4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CRMP-3 HDRプラスミド（h）および CRMP-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDPYSL4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDPYSL4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。