Cripto Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417492-ACT

O TDGF1 humano codifica a Cripto (também conhecida como CRIPTO-1), um correceptor ancorado por GPI que modula o padrão embrionário e as decisões de destino celular ao ajustar a sinalização da família TGF-β. A Cripto facilita a sinalização NODAL/ALK4/7 e interage com vias como SMAD2/3, WNT/β-catenina e PI3K–AKT para regular a transição epitélio–mesênquima, a migração e fenótipos do tipo célula-tronco. A expressão desregulada de TDGF1 é frequentemente associada a programas de desenvolvimento alterados em estados celulares relevantes para doenças, incluindo sinalização proliferativa, invasividade e bloqueio da diferenciação. Essas propriedades tornam a Cripto uma ferramenta molecular útil para investigar a reprogramação da sinalização do desenvolvimento e a interconexão de vias oncogênicas em sistemas modelo humanos.

Cripto O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TDGF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cripto O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TDGF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TDGF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cripto. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TDGF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cripto no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cripto em células tumorais com expressão de TDGF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.