Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
CRF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400770
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CRF O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CRF, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CRF Anticorpo (2B11): sc-293187
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CRF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400770 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O hormônio liberador de corticotropina (CRH) codifica o neuropeptídeo CRF, um regulador central do eixo hipotálamo–hipófise–adrenal (HPA) que coordena respostas endócrinas, autonômicas e comportamentais ao estresse fisiológico. Após a secreção, o CRF sinaliza principalmente por meio de CRHR1/CRHR2 para ativar as vias Gs–adenilil ciclase–cAMP/PKA, modulando a transcrição dependente de CREB e os desfechos neuroendócrinos subsequentes, incluindo a liberação de ACTH. A atividade de CRH/CRF também interage com a sinalização inflamatória e metabólica, influenciando a produção de citocinas e a homeostase energética no cérebro e em tecidos periféricos. A desregulação da expressão de CRH ou da sinalização dos receptores de CRF tem sido associada a fenótipos neuropsiquiátricos relacionados ao estresse e a distúrbios inflamatórios e gastrointestinais, tornando-a relevante para estudos mecanísticos da interação entre estresse e imunidade.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CRF (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CRH em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CRH, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CRH na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CRF.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CRH para a investigação da sinalização de CRF, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CRH críticos para a função CRF
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CRH para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CRF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CRF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CRH. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CRF Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CRF (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CRH para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CRH definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.