CRF-BP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403849-NIC

CRHBP codifica a proteína ligadora do fator liberador de corticotropina (CRF-BP), uma glicoproteína secretada que se liga ao CRH e às urocortinas relacionadas para regular a biodisponibilidade dos ligantes e o engajamento dos receptores no eixo hipotálamo–hipófise–adrenal (HPA). Ao atuar como tampão de peptídeos livres da família do CRH, a CRF-BP modula as vias de sinalização a jusante mediadas por CRHR1/CRHR2, que convergem em cAMP/PKA e em programas transcricionais que controlam a responsividade ao estresse, a secreção neuroendócrina e o tônus inflamatório. A expressão de CRHBP é proeminente no cérebro e em tecidos periféricos, onde pode influenciar a comunicação neuroimune e a homeostase endócrina. A desregulação da sinalização CRH–urocortina e dos padrões de expressão de CRHBP tem sido associada a fenótipos neuropsiquiátricos relacionados ao estresse, a alterações na regulação metabólica e a processos inflamatórios, tornando-a relevante para estudos mecanísticos dos circuitos de estresse e da biologia periférica do CRF.

CRF-BP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CRHBP em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CRHBP. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CRHBP. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CRHBP interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.