CREB3L2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404393-ACT

CREB3L2 (proteína 3 semelhante ao CREB que se liga ao elemento responsivo a cAMP 2) é um fator de transcrição bZIP da família CREB/ATF que atua na sinalização de estresse do retículo endoplasmático (RE) e na homeostase da via secretória. Após proteólise intramembranar regulada, o CREB3L2 pode translocar-se para o núcleo para modular programas transcricionais ligados à resposta a proteínas mal dobradas (unfolded protein response), à função do Golgi/RE e à diferenciação celular. Ele contribui para a adaptação de células altamente secretoras e interage com vias que governam o controle de qualidade de proteínas, a expressão gênica responsiva ao estresse e a remodelação metabólica. O CREB3L2 também está implicado em fusões gênicas oncogênicas, como a FUS–CREB3L2 observada no sarcoma fibromixoide de baixo grau, reforçando sua relevância para o estudo do controle transcricional aberrante na biologia do câncer.

CREB3L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CREB3L2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CREB3L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CREB3L2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CREB3L2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CREB3L2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CREB3L2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CREB3L2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CREB3L2 em células tumorais com expressão de CREB3L2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.