CRABP-I Lentiviral Activation Particles (h2): sc-405485-LAC-2

Das humane CRABP1-Gen kodiert das zelluläre Retinsäure-bindende Protein 1 (CRABP-I), einen hochaffinen zytosolischen Carrier, der die intrazelluläre Verfügbarkeit und Pufferung von Retinsäure reguliert und dadurch die Dynamik von Retinoidgradienten sowie die nachgeschaltete Signalübertragung über Retinsäurerezeptoren prägt. Durch die Kontrolle der Verteilung und des Metabolismus von Retinoiden beeinflusst CRABP-I Transkriptionsprogramme, die mit Zelldifferenzierung, Proliferation und Entwicklungs-Musterbildung verknüpft sind, und ist zudem an Prozessen wie neuronaler Funktion und entzündlicher Signalgebung beteiligt. Veränderte CRABP1-Expression und eine gestörte Retinoidverarbeitung wurden in Kontexten beschrieben, die für die Krebsbiologie, neuroentwicklungsbezogene und neurodegenerative Phänotypen sowie metabolische Dysregulation relevant sind, was CRABP1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien macht. Die Geneditierung von CRABP1 unterstützt die Aufschlüsselung von Signalwegen des Retinoidtransports und retinsäure-antwortender Gennetzwerke und ermöglicht gezielte Perturbationsexperimente in zellulären Modellen, um phänotypische Konsequenzen und regulatorische Schaltkreise zu untersuchen.

CRABP-I Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CRABP1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CRABP-I Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CRABP1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CRABP-I-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CRABP1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.