CRABP-I Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-405485-LAC-2

O CRABP1 humano codifica a proteína celular de ligação ao ácido retinoico 1 (CRABP-I), um transportador citosólico de alta afinidade que regula a disponibilidade e o tamponamento intracelulares do ácido retinoico, moldando a dinâmica dos gradientes de retinoides e a sinalização downstream mediada por receptores de ácido retinoico. Ao controlar a compartimentalização e o metabolismo dos retinoides, a CRABP-I influencia programas transcricionais ligados à diferenciação e proliferação celulares e ao estabelecimento de padrões durante o desenvolvimento, além de se articular com processos como a função neuronal e a sinalização inflamatória. Alterações na expressão de CRABP1 e no manejo de retinoides têm sido relatadas em contextos relevantes para a biologia do câncer, fenótipos do neurodesenvolvimento e de doenças neurodegenerativas e desregulação metabólica, o que a torna um nó útil para estudos mecanísticos. A edição gênica de CRABP1 dá suporte à dissecação de vias de transporte de retinoides e de redes gênicas responsivas ao ácido retinoico (AR), permitindo experimentos de perturbação direcionada em modelos celulares para avaliar consequências fenotípicas e circuitos regulatórios.

As Partículas de Ativação Lentivirais CRABP-I (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CRABP1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CRABP-I (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CRABP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CRABP-I. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CRABP1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.