CRABP-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419790

概要

Crabp1は、細胞性レチノイン酸結合タンパク質1（CRABP-I）をコードしています。CRABP-Iは高親和性の細胞内キャリアとして働き、オールトランス型レチノイン酸（all-trans retinoic acid）を緩衝・輸送することで、細胞質および核内におけるレチノイドの利用可能性を調節します。レチノイン酸の分配や代謝を調整することにより、CRABP-Iは細胞運命決定、分化、組織パターニングを制御するRA依存的な転写プログラムに影響を与えます。マウス系では、Crabp1は、RA分解との相互作用やビタミンA由来シグナルに対する細胞応答性などを含め、典型的なRAR/RXR活性化とは異なる文脈依存的なレチノイドシグナル伝達ダイナミクスを解析するために用いられます。レチノイドの取り扱いの変化は、発生表現型や、分化・恒常性の破綻に関連する疾患で広く重要であるため、Crabp1は経路レベルの摂動研究に有用な結節点となります。

CRABP-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCrabp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Crabp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Crabp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CRABP-Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CRABP-Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Crabp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CRABP-Iの機能に不可欠なCrabp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Crabp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CRABP-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCRABP-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Crabp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CRABP-I HDRプラスミド（m）および CRABP-I HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCrabp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCrabp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。