CPTI Plasmide Double Nickase (h): sc-401811-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CPTI Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CPTI Double Nickase Plasmid (h) e il CPTI Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CPT1A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CPTI Plasmide Double Nickase (h) | sc-401811-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CPTI Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401811-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CPT1A codifica la carnitina palmitoiltransferasi 1A (CPTI), l’enzima limitante della velocità che trasferisce gruppi acilici a catena lunga alla carnitina per consentirne l’importazione mitocondriale e la β-ossidazione. Controllando il flusso degli acidi grassi verso i mitocondri, CPTI coordina il catabolismo lipidico con l’equilibrio energetico cellulare e si integra con la segnalazione di AMPK, con i programmi trascrizionali regolati da PPAR e con la chetogenesi in condizioni di stress nutritivo. Un’alterata attività di CPT1A è stata associata a errori congeniti dell’ossidazione degli acidi grassi e a fenotipi metabolici che coinvolgono la gestione epatica dei lipidi e l’omeostasi del glucosio. In oncologia e nella biologia delle cellule immunitarie, l’ossidazione degli acidi grassi dipendente da CPT1A è spesso studiata come determinante del controllo redox, della sopravvivenza sotto stress metabolico e di stati bioenergetici specifici di linea cellulare.
CPTI Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CPT1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CPT1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CPT1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CPT1A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.