CPS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402014-ACT

O gene CPS1 humano codifica a carbamoil‑fosfato sintetase 1, uma enzima mitocondrial que catalisa a primeira etapa comprometida do ciclo da ureia, convertendo amônia e bicarbonato em carbamoil‑fosfato com uso de ATP. Essa atividade é central para a eliminação hepática de nitrogênio e se conecta ao catabolismo de aminoácidos, ao metabolismo mitocondrial e à biossíntese downstream de arginina. Alterações na expressão ou na função de CPS1 estão associadas à hiperamonemia e a uma desregulação metabólica mais ampla, e o status de CPS1 é frequentemente avaliado em estudos de fisiologia hepática, respostas ao estresse mitocondrial e balanço de nitrogênio. Em pesquisas oncológicas e metabólicas, CPS1 também é usado como um marcador dependente do contexto de reprogramação metabólica e de atividade do ciclo da ureia associada à linhagem celular.

CPS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CPS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CPS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CPS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CPS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CPS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CPS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CPS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CPS1 em células tumorais com expressão de CPS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.