CPI-17 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401966-LAC

PPP1R14A codifica a CPI-17, um inibidor dependente de fosforilação da fosfatase da cadeia leve de miosina (MLCP/PP1) que amplifica a sinalização contrátil ao manter a fosforilação da cadeia leve regulatória da miosina. Após ativação por PKC e por sinais ligados a RhoA/ROCK, a CPI-17 integra vias de sensibilização ao Ca²⁺ para modular o tônus do músculo liso, a tensão do citoesqueleto e a dinâmica actomiosina. Esse nó regulatório influencia a contratilidade mediada por GPCR, a migração celular e as propriedades de barreira em tecidos vasculares e viscerais. A desregulação da sinalização PPP1R14A/CPI-17 tem sido associada a alterações de hipercontratilidade do músculo liso e a processos de remodelamento relevantes para a biologia de doenças cardiovasculares e das vias aéreas, sustentando seu uso como um recurso mecanístico em estudos de sinalização e fisiologia tecidual.

As Partículas de Ativação Lentivirais CPI-17 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PPP1R14A numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CPI-17 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PPP1R14A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CPI-17. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PPP1R14A e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.