COX4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400616-ACT

ヒトCOX4I1は、シトクロムcオキシダーゼサブユニットIVアイソフォーム1（COX4）をコードする。COX4は核コード型のミトコンドリア複合体IVの構造要素であり、シトクロムcから分子状酸素への電子移動の制御に関与し、酸化的リン酸化を支える。複合体IV活性に影響することで、COX4はミトコンドリア膜電位の維持、ATP産生、活性酸素種（ROS）の恒常性に寄与し、より広範な生体エネルギー制御およびストレス応答プログラムに組み込まれている。COX4I1の発現と複合体IVの量比（ストイキオメトリー）は、ミトコンドリア機能障害、低酸素適応、ならびに増殖性・変性性疾患状態に伴う代謝リプログラミングに関する研究で頻繁に評価される。呼吸鎖の完全性を示す主要マーカーとして、COX4はミトコンドリア生合成やタンパク質恒常性（プロテオスタシス）の変化を、細胞代謝の変容と結び付けて解析する際に一般的に用いられる。

COX4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COX4I1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COX4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COX4I1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOX4I1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COX4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOX4I1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOX4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOX4I1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOX4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。