Cox-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422489-ACT

O Ptgs2 de camundongo codifica a ciclooxigenase-2 (Cox-2), uma enzima induzível e limitante de velocidade que converte o ácido araquidônico em prostaglandina H2, um precursor de diversos prostanoides bioativos. A expressão de Cox-2 é rapidamente aumentada por citocinas inflamatórias, fatores de crescimento e estímulos microbianos a jusante das vias de sinalização de NF-κB, AP-1, MAPK e TLR, conectando a ativação da imunidade inata a respostas transcricionais e parácrinas dependentes de eicosanoides. Por controlar a produção de prostaglandinas, o Ptgs2 influencia o tônus vascular, o recrutamento de leucócitos, a sensibilização à dor e o remodelamento tecidual, e é frequentemente usado como um marcador molecular de ativação inflamatória. A atividade desregulada de Cox-2 está implicada em modelos de inflamação crônica, microambientes promotores de tumor e processos neuroinflamatórios e cardiovasculares, o que a torna um alvo-chave para estudos mecanísticos da sinalização impulsionada por prostaglandinas.

Cox-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ptgs2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cox-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ptgs2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ptgs2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cox-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ptgs2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cox-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cox-2 em células tumorais com expressão de Ptgs2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.