Corin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404362-ACT

ヒトのCORINは、コリン（corin）というII型膜貫通型セリンプロテアーゼをコードしており、心筋細胞で顕著に発現し、プロ心房性ナトリウム利尿ペプチド（pro-ANP）およびプロ脳性ナトリウム利尿ペプチド（pro-BNP）を成熟したナトリウム利尿ホルモンへとタンパク質分解的に活性化します。このナトリウム利尿ペプチドのプロセシング軸を介して、コリンはcGMP依存性シグナル伝達、ナトリウムおよび水の恒常性、血管トーン、ならびに血行動態ストレスに対する心臓リモデリング応答に影響を与えます。CORIN活性は細胞外でのプロテオリシスや膜結合型プロテアーゼの制御と連関し、肥大および線維化経路を形作る下流の転写プログラムに影響します。CORINの遺伝学的変化や発現変動は、ナトリウム利尿ペプチドシグナルの調節異常および心血管系の表現型と関連づけられており、心機能や血圧調節の機序研究における重要性を支持しています。

Corin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CORINの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Corin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CORIN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCORIN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Corinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCORIN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCorin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCORIN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCorin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。