Corin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404362-ACT

O CORIN humano codifica a corina, uma protease serina transmembranar do tipo II expressa de forma proeminente em cardiomiócitos, onde ativa proteoliticamente o pró-peptídeo natriurético atrial e o pró-peptídeo natriurético do tipo B, convertendo-os em hormônios natriuréticos maduros. Por meio desse eixo de processamento de peptídeos natriuréticos, a corina influencia a sinalização dependente de cGMP, a homeostase de sódio e água, o tônus vascular e as respostas de remodelamento cardíaco ao estresse hemodinâmico. A atividade do CORIN interage com a proteólise extracelular e com a regulação de proteases ancoradas à membrana, impactando programas transcricionais a jusante que moldam vias hipertróficas e fibróticas. Alterações genéticas e de expressão em CORIN têm sido associadas à desregulação da sinalização de peptídeos natriuréticos e a fenótipos cardiovasculares, sustentando sua relevância em estudos mecanísticos da função cardíaca e da regulação da pressão arterial.

Corin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CORIN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Corin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CORIN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CORIN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Corin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CORIN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Corin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Corin em células tumorais com expressão de CORIN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.