COPB Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404275-NIC

COPB1 codifica a subunidade COPB do complexo coatômero I (COPI), um componente central do revestimento de vesículas que medeia o transporte retrógrado do Golgi para o retículo endoplasmático e regula o tráfego intragolgiano. Por meio do seu papel na seleção de carga e no brotamento de vesículas, COPB contribui para a manutenção da arquitetura do Golgi, a homeostase do RE e o fluxo da via secretória, conectando-se a processos de proteostase e de resposta ao estresse, como a resposta a proteínas mal dobradas (UPR). Alterações na função do COPI podem desorganizar a triagem de proteínas e a dinâmica de membranas, com efeitos posteriores sobre a viabilidade e a sinalização celular, tornando COPB1 um ponto útil para estudar a comunicação entre organelas e o tráfego de membranas em células humanas. Vias de transporte intracelular desreguladas são frequentemente implicadas em mecanismos de doenças proliferativas e do neurodesenvolvimento, o que motiva pesquisas sobre fenótipos de tráfego dependentes de COPB1.

COPB O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus COPB1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de COPB1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função COPB1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com COPB1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.