Complexin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406799

概要

CPLX2は、シナプス前終末の細胞質タンパク質であるコンプレキシン2をコードしており、組み立てられたSNARE複合体に結合して、シナプス小胞のプライミングおよびカルシウム誘発性のエキソサイトーシスを調節します。小胞融合の確率と同期的な神経伝達物質放出を制御することで、コンプレキシン2は活動依存的な神経伝達と短期シナプス可塑性に寄与します。CPLX2に関連する機能障害は、興奮性／抑制性バランスの変化や、神経精神疾患・神経発達症に関連する回路レベルの表現型、さらには神経変性に伴うシナプス変化との関連で研究されてきました。これらの特徴により、CPLX2は、ヒト細胞モデルにおいてSNARE介在性の膜融合、Ca2+依存性シグナル伝達、ならびにシナプス前小胞サイクルの制御を解析するうえで有用な結節点となります。

Complexin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCPLX2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CPLX2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CPLX2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Complexin-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Complexin-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CPLX2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Complexin-2の機能に不可欠なCPLX2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CPLX2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Complexin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびComplexin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CPLX2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Complexin-2 HDRプラスミド（h）および Complexin-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCPLX2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCPLX2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。