COL6A3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402899-ACT

COL6A3 codifica la catena alfa-3 del collagene di tipo VI, un componente chiave della matrice extracellulare che si assembla in microfibrille “a perle” a sostegno dell’architettura tissutale e della meccanotrasduzione. Le matrici ricche di COL6A3 influenzano l’adesione, la migrazione e i segnali di sopravvivenza cellulare attraverso vie legate a integrine e adesioni focali, plasmando l’organizzazione dello stroma e il rimodellamento extracellulare. L’espressione deregolata di COL6A3 e le alterazioni della rete di collagene VI sono associate a programmi di rimodellamento di tipo fibrotico e a cambiamenti nella composizione del microambiente tumorale; inoltre, varianti nei geni del collagene VI sono state collegate a fenotipi ereditari del tessuto connettivo e neuromuscolari. In quanto gene strutturale della matrice con cross-talk di segnalazione, COL6A3 è ampiamente utilizzato per studiare l’assemblaggio della MEC, le interazioni stroma–epitelio e le risposte di rimodellamento a segnali infiammatori o meccanici.

COL6A3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di COL6A3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

COL6A3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus COL6A3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione COL6A3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di COL6A3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus COL6A3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da COL6A3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via COL6A3 nelle cellule tumorali con espressione di COL6A3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.