COL6A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401069

Visão geral

COL6A1 codifica a cadeia alfa 1 do colágeno tipo VI, um componente central das microfibrilas de colágeno VI que se montam na matriz extracelular e contribuem para a resistência à tração dos tecidos e para a adesão célula–matriz. As redes de colágeno VI coordenam a organização da matriz extracelular e influenciam a mecanotransdução, a sinalização de sobrevivência e a diferenciação celular em tecidos conjuntivos, com ligações funcionais a vias mediadas por integrinas e à estabilidade da membrana basal. Alterações na expressão de COL6A1 ou na sua incorporação à matriz podem perturbar a remodelação da matriz extracelular e a arquitetura do estroma, afetando a integridade das miofibras e o comportamento dos fibroblastos. A desregulação do colágeno VI tem sido associada a fenótipos neuromusculares e do tecido conjuntivo e também é estudada no contexto de fibrose e da remodelação da matriz associada a tumores.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO COL6A1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene COL6A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do COL6A1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do COL6A1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína COL6A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de COL6A1 para a investigação da sinalização de COL6A1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) COL6A1 críticos para a função COL6A1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos COL6A1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo COL6A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo COL6A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus COL6A1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo COL6A1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR COL6A1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia COL6A1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo COL6A1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.