COL4A5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401199-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- COL4A5 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- COL4A5ダブルニカースプラスミド（h）およびCOL4A5ダブルニカースプラスミド（h2）は、COL4A5を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
COL4A5 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401199-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL4A5 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401199-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A5はIV型コラーゲンのα5鎖をコードしており、基底膜の中核をなす構造要素です。COL4A3およびCOL4A4とともにα3α4α5(IV)ネットワークを形成します。この特殊化したコラーゲン足場は、糸球体・蝸牛・眼の基底膜の完全性を支え、インテグリンや関連シグナル伝達経路との相互作用を介して、細胞‐マトリックス接着、メカノトランスダクション、細胞外マトリックスのリモデリングにも影響を与えます。COL4A5が障害されると基底膜の組成や濾過バリアの性質が変化し、その機能不全は遺伝性腎症に加え、聴覚や視覚に影響する症候群性の特徴とも関連します。そのためCOL4A5は、細胞モデルやオルガノイドモデルを用いて、腎発生、ポドサイト生物学、細胞外マトリックスの組織化に関する研究で広く解析されています。
COL4A5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL4A5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL4A5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL4A5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL4A5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。