COL4A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401792-NIC

COL4A1はIV型コラーゲンのα1鎖をコードしており、基底膜を構成する中核的な構造要素です。COL4A2とともにコラーゲンIVネットワークを形成して組み上がり、組織の完全性および微小血管の安定性を支えます。この細胞外マトリックスの足場は、上皮細胞・内皮細胞の極性形成、透過性の調節に関わる細胞—マトリックス相互作用を組織化し、インテグリン連結シグナル伝達を介したメカノトランスダクションにも影響します。COL4A1の機能は、基底膜の組み立て、細胞外マトリックスの構築、そして血管の成熟や組織恒常性に影響する血管新生プログラムと交差しています。COL4A1の制御異常や病的変異は、小血管病変や多臓器にわたる基底膜異常と関連しており、血管生物学、バリア機能、ならびにマトリックス依存的な細胞表現型を研究するうえで重要な標的となります。

COL4A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL4A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL4A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL4A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL4A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。