COL4A1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401792-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- COL4A1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase COL4A1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase COL4A1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para COL4A1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:COL4A1 Anticorpo (5E10): sc-517572
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
COL4A1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401792-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL4A1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401792-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A1 codifica a cadeia alfa-1 do colagénio tipo IV, um componente estrutural central das membranas basais que se organiza em redes de colagénio IV juntamente com COL4A2 para sustentar a integridade dos tecidos e a estabilidade microvascular. Este andaime da matriz extracelular ajuda a organizar as interações célula–matriz que moldam a polaridade epitelial e endotelial, regulam a permeabilidade e influenciam a mecanotransdução através de sinalização mediada por integrinas. A função de COL4A1 cruza-se com a montagem da membrana basal, a organização da matriz extracelular e programas angiogénicos que afetam a maturação dos vasos e a homeostase tecidular. A desregulação ou variação patogénica em COL4A1 está associada a patologia de pequenos vasos e a defeitos multissistémicos da membrana basal, tornando-o um alvo relevante para estudar biologia vascular, função de barreira e fenótipos celulares dependentes da matriz.
COL4A1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus COL4A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de COL4A1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função COL4A1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com COL4A1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.