COL1A2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400598

Visão geral

COL1A2 codifica a cadeia pro-α2 do colagénio tipo I, um colagénio fibrilar principal que se monta em heterotrímeros e confere resistência à tração aos tecidos conjuntivos. Após a secreção e o processamento extracelular, o colagénio tipo I é incorporado na matriz extracelular (MEC), onde regula a arquitetura dos tecidos e a mecanotransdução através de sinalização dependente de integrinas e de recetores do domínio discoidina (DDR). A expressão de COL1A2 e a fibrilogénese do colagénio interligam-se com vias de remodelação da MEC, incluindo a sinalização de TGF-β, a atividade de metaloproteinases da matriz e programas de ativação de fibroblastos. A desregulação de COL1A2 contribui para alterações na rigidez da matriz e deposição aberrante de colagénio, estando implicada em doenças hereditárias do tecido conjuntivo e em contextos de remodelação fibrótica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO COL1A2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene COL1A2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do COL1A2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do COL1A2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína COL1A2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de COL1A2 para a investigação da sinalização de COL1A2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) COL1A2 críticos para a função COL1A2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos COL1A2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo COL1A2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo COL1A2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus COL1A2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo COL1A2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR COL1A2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia COL1A2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo COL1A2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.