COL14A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405019-ACT

COL14A1 codifica o colágeno tipo XIV alfa 1, um colágeno FACIT que se associa a colágenos fibrilares na matriz extracelular para regular a fibrilogênese do colágeno, a organização da matriz e a biomecânica dos tecidos. É expresso de forma proeminente em tecidos conjuntivos derivados do mesênquima e contribui para interações célula–matriz que influenciam a adesão, a migração e a sinalização de mecanotransdução. A atividade de COL14A1 se cruza com processos de remodelação da matriz extracelular e vias ligadas à organização do estroma, incluindo a montagem de colágeno e respostas profibróticas associadas ao TGF-β. Padrões desregulados de expressão de COL14A1 e de deposição de matriz foram relatados em contextos de estroma fibrótico e associado a tumores, sustentando seu uso como alvo de pesquisa em biologia da matriz extracelular e estudos de remodelação tecidual.

COL14A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COL14A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COL14A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COL14A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COL14A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COL14A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COL14A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COL14A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COL14A1 em células tumorais com expressão de COL14A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.