COL12A1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402361-NIC

O gene humano COL12A1 codifica a cadeia alfa 1 do colágeno tipo XII, um colágeno associado a fibrilas que se localiza na matriz extracelular e interage com fibrilas que contêm colágeno I para regular a arquitetura da matriz, as propriedades de resistência à tração e a comunicação célula–matriz. Por meio de seus papéis na fibrilogênese do colágeno, na organização tecidual e na mecanotransdução, o COL12A1 contribui para o acoplamento ao citoesqueleto e para vias de sinalização que moldam programas de adesão e migração. Alterações na expressão ou na função de COL12A1 têm sido associadas a doenças hereditárias do tecido conjuntivo e a fenótipos que afetam a integridade muscular e esquelética, tornando-o relevante para estudos de remodelação da matriz e de biologia do desenvolvimento. Em pesquisas sobre câncer e fibrose, o COL12A1 é frequentemente analisado como parte de assinaturas da matriz extracelular estromal associadas a mudanças na rigidez tecidual e ao comportamento invasivo.

COL12A1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus COL12A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de COL12A1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função COL12A1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com COL12A1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.