COL12A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402361-ACT

COL12A1 codifica a cadeia alfa 1 do colágeno tipo XII, um colágeno associado a fibrilas com hélices triplas interrompidas (FACIT), que se localiza na matriz extracelular e se liga a fibrilas que contêm colágeno I para regular a fibrilogênese, a organização da matriz e as propriedades mecânicas dos tecidos. É enriquecido em tecidos conjuntivos e contribui para a adesão célula–matriz, a mecanotransdução e o remodelamento coordenado durante o desenvolvimento e a reparação. Alterações na expressão ou na função de COL12A1 estão associadas a doenças hereditárias do tecido conjuntivo com fenótipos musculoesqueléticos, refletindo o seu papel na integridade de tendões/ligamentos e nas interfaces cartilagem-osso. Na biologia do câncer e no remodelamento fibrótico, COL12A1 é frequentemente estudado como um componente estromal da matriz extracelular associado à rigidez da matriz e a microambientes invasivos.

COL12A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COL12A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COL12A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COL12A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COL12A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COL12A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COL12A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COL12A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COL12A1 em células tumorais com expressão de COL12A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.