COL11A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403512-ACT

COL11A1 codifica a cadeia α1 do colágeno tipo XI, um colágeno fibrilar quantitativamente pouco abundante, porém estruturalmente crítico, que regula a nucleação das fibrilas de colágeno, o seu diâmetro e a organização da matriz extracelular (MEC) em tecidos conjuntivos. O COL11A1 integra-se em fibrilas heterotípicas com os colágenos II e IX, sustentando a biomecânica da cartilagem e influenciando vias de adesão célula–matriz, migração e mecanotransdução que moldam a arquitetura tecidual. A expressão alterada de COL11A1 e a remodelação da MEC estão associadas a fenótipos esqueléticos do desenvolvimento e têm sido relacionadas a programas estromais associados a tumores, nos quais a composição da matriz pode modular a sinalização ligada à invasão. Como componente da matriz, o COL11A1 é frequentemente estudado no contexto da montagem da MEC, da condrogênese e da regulação do comportamento celular dependente do microambiente.

COL11A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COL11A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COL11A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COL11A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COL11A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COL11A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COL11A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COL11A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COL11A1 em células tumorais com expressão de COL11A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.