COL10A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401960-ACT

COL10A1 codifica o colagénio tipo X cadeia alfa 1, um colagénio de cadeia curta expresso predominantemente por condrócitos hipertróficos durante a ossificação endocondral. Contribui para a organização da matriz extracelular e para a transição de cartilagem para osso ao moldar a matriz pericelular e ao suportar a remodelação associada à mineralização. A expressão de COL10A1 está estreitamente acoplada a programas de diferenciação de condrócitos regulados por vias como a sinalização TGF-β/BMP, o controlo transcricional mediado por RUNX2 e processos de renovação/turnover da matriz. A desregulação de COL10A1 está associada a perturbações do desenvolvimento esquelético, incluindo a condrodisplasia metafisária de Schmid, e também é observada em contextos patológicos de remodelação da matriz relevantes para a investigação em osso e cartilagem.

COL10A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COL10A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COL10A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COL10A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COL10A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COL10A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COL10A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COL10A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COL10A1 em células tumorais com expressão de COL10A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.