coilin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400927-ACT

ヒトCOIL遺伝子は、カハール小体（Cajal body）の特徴的な足場タンパク質であるコイリン（coilin）をコードしており、小核RNA（snRNA）および小核小体RNA（snoRNA）リボヌクレオタンパク質複合体の組み立てと成熟を協調的に制御することで、pre-mRNAスプライシングおよびRNAプロセシングを支えています。コイリンはスプライソソーム構成因子と相互作用し、核内サブドメイン間におけるRNA–タンパク質複合体の輸送を誘導することで、核構造と遺伝子発現制御を結び付けます。これらの機能を通じて、COILはRNA代謝、リボソーム生合成、ならびに細胞周期に連動した核内構造の編成を司る経路に寄与します。コイリンの局在異常やカハール小体の完全性の破綻は、細胞ストレスや悪性形質転換の状況で観察されており、COILは核内小体の機構解明やトランスクリプトーム制御の研究に有用な標的となります。

coilin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COILの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

coilin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COIL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOIL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性coilinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOIL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcoilin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOIL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcoilin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。