CNP-53 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403527-ACT

NPPC codifica o peptídeo natriurético do tipo C (CNP-53), um hormônio peptídico secretado que sinaliza principalmente por meio do receptor 2 de peptídeos natriuréticos (NPR2/GC-B), elevando o cGMP intracelular e ativando vias dependentes de PKG. Em tecidos humanos, o CNP-53 regula a ossificação endocondral, a proliferação e a diferenciação de condrócitos e a homeostase vascular, integrando-se à sinalização por cGMP para modular a remodelação da matriz extracelular e programas de crescimento celular. A sinalização NPPC–NPR2 cruza com processos regulados por MAPK e por cálcio que moldam o desenvolvimento da cartilagem e o crescimento esquelético. A disrupção genética de NPPC ou do seu eixo receptor está associada a alterações no crescimento longitudinal dos ossos e a displasias esqueléticas, tornando essa via relevante para modelagem da biologia da placa de crescimento e de fenótipos do tecido conjuntivo.

CNP-53 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NPPC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CNP-53 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NPPC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NPPC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CNP-53. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NPPC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CNP-53 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CNP-53 em células tumorais com expressão de NPPC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.