CLK4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419690

Visão geral

Clk4 codifica a CDC-like kinase 4 (CLK4), uma quinase de dupla especificidade que fosforila fatores de splicing ricos em serina/arginina (SR) e ajuda a coordenar o splicing do pré-mRNA com programas transcricionais. Ao modular a atividade das proteínas SR, a CLK4 contribui para escolhas de splicing alternativo que influenciam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a expressão gênica responsiva ao estresse. A sinalização da família CLK se cruza com redes de processamento de RNA que moldam a diversidade do proteoma, e a regulação alterada do splicing é comumente associada à transformação oncogênica e a fenótipos do neurodesenvolvimento em modelos experimentais. Em sistemas murinos, a perturbação de Clk4 oferece uma via acessível para dissecar como as dinâmicas de fosforilação associadas ao spliceossomo afetam isoformas transcricionais específicas de tecido e os resultados de vias a jusante.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CLK4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Clk4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Clk4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Clk4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CLK4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Clk4 para a investigação da sinalização de CLK4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Clk4 críticos para a função CLK4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Clk4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CLK4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CLK4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Clk4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CLK4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CLK4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Clk4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Clk4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.