CLIP-170 Double Nickaseプラスミド (m): sc-425158-NIC

マウスのClip1は、微小管プラス端追跡タンパク質であるCLIP-170をコードしており、エンド結合（EB）タンパク質に結合して、動的な微小管を細胞皮質およびオルガネラ関連因子に連結します。CLIP-170は、微小管の重合、キネトコアの捕捉、ならびに微小管依存的な小胞輸送を制御し、細胞極性、細胞移動、有糸分裂の進行に影響を与えます。細胞骨格リモデリングと細胞内輸送を協調させることにより、CLIP-170は、接着やスピンドルチェックポイントの忠実性を制御する経路など、空間的な組織化に依存するシグナル伝達の出力形成にも寄与します。微小管動態や輸送関連プロセスの破綻は、増殖性および神経発生的な表現型と広く関連するため、Clip1は細胞骨格制御の機構研究に有用な標的となります。

CLIP-170 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Clip1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Clip1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Clip1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Clip1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。