CLIP-170 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401279-ACT

O CLIP1 humano codifica o CLIP-170, uma proteína citoplasmática rastreadora da extremidade positiva que se liga às extremidades dos microtúbulos e as conecta a cargas celulares e a locais corticais. O CLIP-170 coordena a dinâmica dos microtúbulos, a captura pelo cinetócoro e interações com o complexo dineína–dinactina e outros complexos +TIP, sustentando o transporte intracelular, a organização do fuso e a polaridade celular. Por meio dessas funções, o CLIP1 contribui para processos como a progressão mitótica e a migração dirigida, sendo que alterações na regulação dos microtúbulos e nas redes de tráfego intracelular são frequentemente implicadas no comportamento de células tumorais e em disfunções do neurodesenvolvimento. Assim, o CLIP-170 é amplamente estudado em vias que governam a remodelação do citoesqueleto, a segregação cromossômica e o posicionamento de organelas.

CLIP-170 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLIP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CLIP-170 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLIP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLIP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CLIP-170. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLIP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CLIP-170 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CLIP-170 em células tumorais com expressão de CLIP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.